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B 淋巴細胞膜表面免疫球蛋白的檢查
發(fā)布時間: 2023-04-12 點擊次數(shù): 807次原理
SmIg 是B 細胞的抗原識別受體,也是B 細胞特異的表面標志,用直接免疫熒光法可檢查出SmIg。用熒光素標記的抗Ig 抗體,在一定條件下與淋巴細胞混合,熒光素標記的抗Ig 抗體可以與B 細胞表面的Ig 結(jié)合,在熒光顯微鏡下觀察可見B 細胞膜上出現(xiàn)熒光。此方法可用來鑒定B 淋巴細胞。材料與儀器
ICR 小鼠
異硫氰酸熒光素(FITC)標記的兔抗小鼠Ig 抗體 Hank's液
臺式離心機 離心管 吸管 移液管步驟
1. 采用頸椎脫臼法處死小鼠,解剖取出脾臟放入盛有6 ml Hank's液的平皿中,用100 目鋼網(wǎng)研磨,混勻。從中吸取1 ml細胞懸液放入一試管中,加滿Hank's液,離心1000 rpm,10 分鐘,洗滌細胞一遍。傾去上清,沉積的細胞恢復(fù)1 ml容積,即為約1x107/ml的細胞懸液。另取一支試管,吸取1x107/ml的細胞懸液0.4 ml加Hank's液3.6 ml,即為1x106/ml的細胞懸液。2. 取2 ml離心管兩只,各加入1x106 /ml的細胞懸液1 ml,用臺式離心機離心2000 rpm,3 分鐘,棄去上清液。一支加入熒光素標記的兔抗鼠Ig抗體100 ul,另一支不加抗體作對照,置4 ℃冰箱30 分鐘。3. 取出離心管,用Hank's 液洗滌細胞兩次,以去除游離的抗體,最后一次離心后棄去上清液,留少許回流液,混勻,滴片,用熒光顯微鏡觀察。注意事項
一、在滴片前要去除游離的抗體,以避免假陽性結(jié)果。常見問題
實驗結(jié)果熒光顯微鏡觀察,落射激發(fā)光下SmIg 陽性細胞可見環(huán)狀或斑點狀熒光。用鎢絲燈光源透射光照明計數(shù)同一視野內(nèi)淋巴細胞總數(shù),共計數(shù)200~300 個淋巴細胞,算出其中SmIg 陽性細胞的百分數(shù)。深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O(shè)在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。
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