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免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)失敗了千萬(wàn)不要慌！

發(fā)布時(shí)間： 2022-11-03　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1439次

　　免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染在細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)中占據(jù)重要地位，廣泛用于基因與蛋白功能研究，成為實(shí)驗(yàn)室工作中的常規(guī)技術(shù)手段之一。沒有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)，需要根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)進(jìn)行選擇。理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率，低細(xì)胞毒性和對(duì)正常生理學(xué)的影響最小，并且易于使用和具有可重復(fù)性等特點(diǎn)。常用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法有磷酸鈣法、陽(yáng)離子脂質(zhì)體法、病毒轉(zhuǎn)染法和電穿孔法。
　　然而，免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)失敗也不要驚訝，常見的異常結(jié)果是細(xì)胞大量死亡、轉(zhuǎn)染效率不高、重復(fù)實(shí)驗(yàn)不穩(wěn)定。如何找到問題所在，讓實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，就顯得比較重要。例如細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)失敗導(dǎo)致細(xì)胞大量死亡如何處理我們根據(jù)以下的分析來(lái)針對(duì)性解決：
　　1.細(xì)胞狀態(tài)不佳：選擇生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。
　　2.核酸純度不夠或內(nèi)毒素過高：采用高質(zhì)量核酸與去內(nèi)毒素的核酸。
　　3.目的蛋白對(duì)細(xì)胞的毒性：嘗試進(jìn)行再設(shè)計(jì)。
　　4.轉(zhuǎn)染試劑過多：降低轉(zhuǎn)染試劑的量；轉(zhuǎn)染后4-6h換液。
　　5.污染：排查污染源或重新復(fù)蘇細(xì)胞。
　　6.抗生素存在：特別是陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使抗生素可以進(jìn)入細(xì)胞，降低細(xì)胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低，可降低抗生素濃度或不使用抗生素。
　　7.營(yíng)養(yǎng)不足：如果無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染的，要根據(jù)狀態(tài)及時(shí)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)。

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