使用細胞細胞包被液包被細胞培養(yǎng)板，將傳代或復蘇凍存的人間充質(zhì)干細胞接種到6孔板上，密度為2×105 -3×105 cells/cm2或2×105 -3×105 cells/孔，置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當細胞匯合度達到80%-90%時，小心的將孔內(nèi)間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基吸掉，向6孔板中加入2mL人間充質(zhì)干細胞脂肪分化培養(yǎng)基,以此記為第0天。

以下是總結(jié)的染色方法     

染色步驟：

（1） 先小心輕緩倒去培養(yǎng)液。 
（2） 用pbs輕緩漂洗。
（3）加10%中性甲醛或者95%以上的酒精固定30min以上
（4） 稀釋改良型即用油紅染色試劑盒，油紅：PBS＝3:2，室溫放置10min
（5）染色10-20min左右，加的體積覆蓋住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml。
（6）脫色，用75%酒精/60%異丙醇漂洗，除去多余的染料

（7） 復染，淡蘇木染色1/5分鐘，pbs漂洗（這一步不做也可，看試驗需要，并且蘇木素會把胞漿染紅，如要顯示核， hoechst33342也可以，濃度5微克/毫升染10分鐘即可把核染上）。
（8）甘油明膠封片（封片后可長期保存）。

（9） 若不用明膠封片，請盡快拍照。

油紅O染色試劑盒在傳代培養(yǎng)中，接種密度是影響體外培養(yǎng)間質(zhì)干細胞增殖潛能的重要因素。低密度接種時，間質(zhì)干細胞的增殖能力明顯提高，而誘導細胞分化時則需要較高的細胞密度，這可能與分化時細胞與細胞間的相互作用有關。而在培養(yǎng)過程中，若細胞過度融合會促進其分化趨向，故要保持干細胞未分化狀態(tài)，要及時傳代。

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